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产品名称:TonkBio RT Reagent Kit(for qPCR)

英文名称:TonkBio RT Reagent Kit(for qPCR)

产品描述:TonkBio RT Reagent Kit是专门用于两步法RT-PCR的步,含有反转录反应所需的全部试剂。具有较强的延伸能力的ToneScript M-MLV能够在短时间内高效的合成用于qPCR的cDNA。操作简单,适合进行高通量分析。可以配合SYBR Green法和Taqman探针法做下一步基因表达分析。

产品特点:

1、可以、高效合成qPCR用的cDNA,是两步法反转录的优选试剂。

2、提供了两种反转录引物,OligodT primer和Random primer,可根据具体反应情况使用。反转录时可以使用OligodT primer或Randomprimer,也可以两种引物同时使用。

3、反应仅需15分钟。

4、与qPCR试剂兼容性高。

常见问题解析:

1、 没有RT-PCR产物或产量低

RNA模板降解。RNA的纯度和完整对于反转录得到全长cDNA是非常重要的。提取

的RNA应进行电泳检测以确定其是否降解。同时RNA要避免反复冻融。

RNA模板纯度低。提取RNA的过程中,可能残留一些盐离子、试剂,如EDTA、酚、

胍盐、磷酸盐、多胺等抑制接下来的反转录反应。建议用75%乙醇(DEPC水配制)仔细清洗RNA沉淀。

引物不合适。选择合适的引物,当 RNA是细菌RNA或者是没有polyA尾的RNA要选择随机引物或者特异引物。

目的基因含有复杂二级结构或高GC含量。建议选择随机引物进行反转录,将反转录温度提高至55℃。

2、RNA 中混有基因组 DNA

为避免基因组DNA直接扩增造成结果不准确,①可以在反转录之前对RNA进行Dnase I 的消化,②引物设计时避免基因组扩增,跨较长内含子设计上下游引物。

3、阴性对照中有RT-PCR产物

阴性对照中有RT-PCR产物也表明有DNA的污染。在反转录之前可以对 RNA 进行 DNaseI的消化。